Validation d’une méthode de dosage d’une préparation hospitalière de gélules de riboflavine à 50 mg

5 octobre 2022

B. Querin, A. Schweitzer Chaput, P. Ober, A. Fauqueur, A. Negbane, S. Cisternino, C. Cotteret
Hôpital Universitaire Necker - Enfants Malades, Paris, France

Introduction
La vitamine B2 ou riboflavine est une vitamine hydrosoluble qui joue un rôle fondamental dans la synthèse des hématies et de deux cofacteurs nécessaires à la chaîne respiratoire, ainsi que dans la croissance et la réparation tissulaire. La riboflavine est utilisée dans la prise en charge de maladies métaboliques rares comme les cytopathies mitochondriales pouvant entraîner des comas inexpliqués en réanimation pédiatrique. La forme commercialisée de riboflavine (Beflavine®) en comprimé est indisponible suite à un arrêt de commercialisation depuis Octobre 2019. La mise à disposition de préparations hospitalières sous forme de gélules de riboflavine permettrait de répondre à ces urgences vitales en pédiatrie. La Pharmacopée Européenne exige de réaliser un contrôle de teneur des préparations hospitalières dans le cadre du contrôle libératoire. L’objectif de cette étude est de mettre au point une méthode analytique de dosage de gélules de riboflavine à 50 mg par chromatographie liquide haute performance (CLHP).

Méthodes
Les gélules de riboflavine sont composées de poudre de qualité pharmaceutique de riboflavine (Inresa®) associée à du mannitol (Inresa®). Un système CLHP en polarité de phase inversée Dionex Ultimate 3000 Thermo Scientific® couplé à un détecteur à barrette de diodes (colonne : Agilent Polaris C18-A 250x4,6 mm 5µm), et son logiciel Chromeleon® sont utilisés. La phase mobile est composée d’un tampon citrate 97 mM pH 3,1 et d’Acétonitrile (85:15) avec un débit de 1 mL/min, la longueur d’onde de quantification est de 268 nm et le volume d’injection de 20 µL.
La validation analytique est réalisée selon les recommandations du Conseil international d’harmonisation. Une gamme de concentration en 5 points entre 80 µg/mL et 120 µg/mL (concentration cible : 100 µg/mL), est réalisée sur 3 jours différents et associée à 3 niveaux de contrôles qualité (CQ) : CQ1 = 85 µg/mL, CQ2 = 100 µg/mL et CQ3 = 115 µg/mL. Les taux de recouvrement moyen pour l’exactitude, les coefficients de variations (CV) pour la répétabilité, ainsi que les limites de détection (LD) et quantification (LQ) sont déterminés.

Résultats
La méthode est linéaire (R²= 0,99), fidèle (répétabilité < 2 % ; CV de fidélité intermédiaire < 2 %) et juste (erreur relative < 2 % sur les différents niveaux de contrôle). Aucun effet matrice n’a été retrouvé. Les taux de recouvrement moyen des CQ1, CQ2 et CQ3 sont respectivement de 101,3 % (± 0,1), 99,8 % (± 0,1) et 99,8 % (± 0,1). Les CV de la répétabilité des CQ1, CQ2 et CQ3 sont respectivement de 1,7 %, 1,1 % et 1,2 %. Les LD et LQ sont respectivement de 10 µg/mL et 29 µg/mL.

Discussion-Conclusion
La méthode analytique de dosage développée par CLHP permet de réaliser le contrôle de teneur libératoire exigé par la Pharmacopée Européenne des lots de préparations hospitalières de gélules de riboflavine à 50 mg pour répondre aux indications urgentes de ce traitement en réanimation pédiatrique.

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