Mise en place du radiomarquage du ⁶⁸Ga-NODAGA-Exendin-4

Introduction
L’exendin-4, peptide radiomarqué au gallium 68 (⁶⁸Ga-Exendin-4) est un médicament radiopharmaceutique (MRP) expérimental utilisé en médecine nucléaire dans la détection des insulinomes. Ce travail a pour objectif la mise en place du radiomarquage de l’exendin-4 au ⁶⁸Ga pour la rédaction d’un Dossier de Médicament Expérimental (DME) dans le cadre d’une utilisation en accès compassionnel.

Méthode
Le radiomarquage de l’exendin-4 est réalisé dans une enceinte blindée classe A avec générateur ⁶⁸Ge/⁶⁸Ga élué par 10mL d’HCl 0.1M. 50µg du peptide sont reconstitués avec 1 mL d’eau pour préparations injectables (EPPI) et 200µL sont mis dans le milieu réactionnel avec 50µL d’acide ascorbique 100g/L et 475µL de tampon HEPES 2M. Des colonnes de purification de l’éluât et du produit fini sont utilisées et activées respectivement par une solution NaCl 5M dans HCl 0.1M puis EPPI et air et par éthanol absolu puis EPPI et air. Un mélange EPPI/éthanol (60:40 ;v/v) élue le MRP purifié. La synthèse est réalisée à l’aide d’un automate de synthèse MiniAIO (Trasis) dont la séquence a été testée à froid. Pour ce radiomarquage un chauffage du milieu réactionnel de 15 min à 100°C est nécessaire. La température du milieu réactionnel a été validée au préalable par une sonde de température calibrée. Une solution d’EDTA/Tween est utilisée pour la récupération du MRP du milieu réactionnel.
Trois lots de validation ont été réalisés et contrôlés avec les paramètres suivants : caractères organoleptiques (t0 ; t+2h) ; mesure de l’activité nominale ; pH de la solution (t0 ; t+2h) ; Pureté radiochimique (PRC %) (t0 ; t+2h) : par chromatographie couche mince (CCM) et chromatographie liquide haute performance (CLHP) couplée à un détecteur de radioactivité ; pureté radionucléidique (PRN) par comptage et spectrométrie gamma, période physique à l’aide de l’activitmètre ; recherche du taux d’HEPES (CCM) et d’éthanol ;dosage des endotoxines bactériennes (t0 ; t+2h) ;test de stérilité des lots à J14 (t0 ; t+2h) ; tests de remplissages aseptiques ; tests de biocharge et tests d’intégrité du filtre stérilisant.

Résultats
A t0 et t+2h pour les 3 lots, les solutions sont limpides, incolores et stériles à 14j, les pH de 5.9, les périodes radioactives de 1.13h, les endotoxines < 5UI/mL, les PRC sont de 99.03 ± 0.24% (t0 CCM) ; 97.76 ± 0.39% (t0 CLHP) ; 99.01±0.31% (t+2h CCM) et 95.38±0.32% (t+2h CLHP), les PRN montrent des taux de 68Ge < 0.001%. Les filtres restent intègres à 3.5 bars. Le taux d’éthanol était inférieur à 10% V/V dans les 3 lots et l’HEPES < 200µg/V.

Conclusion
Les méthodes analytiques ont été validé conformément à la Pharmacopée Européenne et les 3 lots de synthèses ont été conformes aux spécifications définies. Suite à l’intégration des données dans le DME, l’Agence Nationale de Sécurité du Médicaments et des produits de santé nous a autorisé à synthétiser et utiliser le ⁶⁸Ga-NODAGA-Exendin-4 en clinique.

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