Étude de la stabilité biologique du Pembrolizumab en solution diluée dans des poches de NaCl 0.9% en polyoléfine
5 octobre 2022
A. Acramel1,2, G. Le Guyader3,4, K. Avrillon4, L. Guyonnet5, J. Denizeau6,7, L. Escalup1, R. Desmaris1, E. Piaggio6,7, C. Guerin5, C. Sedlik6,71 Institut Curie, PSL Research University, Pharmacie Department, F-75005 Paris, France
2 Université Paris Cité, CiTCoM, UMR8038 CNRS, U1268 Inserm, F-75006 Paris, France
3 APHP, Hôpital Henri Mondor, Pharmacie, F-94090 Créteil, France
4 Centre Hospitalier Intercommunal de Créteil, Pharmacie, F-94000 Créteil, France
5 Institut Curie, Cytometry Platform, F-75005 Paris, France
6 Institut Curie, PSL Research University, Translational Research Department, F-75005 Paris, France
7 Inserm U932, F-75005 Paris, France
Objectif
Le pembrolizumab est un anticorps monoclonal de type IgG4, humain, anti-PD1 et indiqué pour traiter différents types de cancer. D’après des données du fournisseur, la solution diluée de pembrolizumab à 1 mg/ml dans une solution saline 0.9%, peut être conservée pendant au moins 1 semaine à 4°C ou à température ambiante (TA). Or, nous avions démontré, par des méthodes convergentes, que des solutions à 1 mg/ml et 4 mg/ml pouvaient être conservées 2 semaines à 4°C et 1 semaine à TA sans altérations physicochimiques. Cependant, seules les poches à 4 mg/ml étaient stables après 30 jours de conservation à 4°C. L’objectif de ce travail est de compléter ces données par une étude de stabilité biologique de solutions de pembrolizumab diluées à 1 et 4 mg/ml.
Méthodes
Des solutions de Pembrolizumab ont été diluées dans du NaCl 0,9% à des concentrations de 1 et 4 mg/ml et conditionnées en poche en polyoléfine. Ces poches ont été préparées de façon séquentielle et conservées à 4°C ou à 25°C pour pouvoir réaliser l’intégralité des tests biologiques le même jour pour tous les échantillons. Des analyses physicochimiques (soit chromatographie ionique et d’exclusion stérique, diffusion dynamique de la lumière, spectroscopie UV et de fluorescence) ont été effectuées en parallèle pour s’assurer de la conformité des solutions.
Les tests ont été réalisés en tripliquât à partir de 3 lots de Pembrolizumab. La stabilité biologique des échantillons a été évaluée d’une part à l’aide d’un test ELISA commercial qui mesure la quantité de pembrolizumab présente dans les poches et d’autre part par cytométrie en flux qui détecte la fixation de l’anticorps à la surface des cellules. La lignée cellulaire Jurkat-PD1 cultivée in vitro a été utilisée pour les tests de cytométrie en flux en utilisant des anticorps secondaires spécifiques des Ig kappa humaines. Les échantillons conservés à 4°C ont été étudiés à J0, J14 et J28. Les échantillons conservés à 25°C à J0 et J7.
Résultats
En comparaison à l’activité fonctionnelle à J0, il n’a pas été observé de différence significative entre les différents échantillons aux différentes concentrations et conditions de conservation étudiées. La capacité de fixation du Pembrolizumab sur sa cible est stable à 4°C durant 28 jours et 7 jours à température ambiante et ce à 1 mg/ml et 4 mg/ml.
Discussion-Conclusion
La stabilité biologique du Pembrolizumab indique que la fixation du Pembrolizumab aux cellules exprimant PD1 n’est pas altérée dans les conditions évaluées ici. Ces résultats suggèrent que les mécanismes impliqués dans l’effet clinique global sont conservés et viennent donc compléter les données de stabilité disponibles sur le Pembrolizumab. La stabilité à appliquer pour nos préparations réalisées en unité de production pourrait donc être reconsidérée.