Elaboration et validation d’une méthode de dosage du Tramadol et du Nefopam en solution pour l’étude de stabilité de médicaments expérimentaux

L’Unité de Préparation des Médicaments a été sollicitée pour la fabrication des unités de traitements (UT) dans le cadre d’une étude clinique institutionnelle évaluant une prise en charge antalgique multimodale par Tramadol (T), Nefopam (N), Ketamine (K) et Remifentanil (R) chez les patients sous ventilation mécanique en réanimation. L’inclusion doit être réalisée dans les 24h suivant l’intubation et la durée de traitement est de 72h soit une fabrication de 43 UT par patient. En raison du délai d’inclusion et du volume de production, la fabrication de kits pour 72h de traitement a été envisagée. Les données de stabilité dans la littérature aux concentrations souhaitées pour K et R était suffisantes (supérieure à 14 jours) contrairement à celles du N et du T (N 48h ¹ / T 14 jours ²). Ainsi, l’objectif de ce travail était d’élaborer et de valider une méthode de dosage indicatrice de stabilité commune pour les solutions de T (8.33 mg.ml-1), N (2.5 mg.ml^-1), et du mélange T et N (0.943- 0.377 mg.ml^-1) en solution dans du chlorure de sodium 0.9%.
La méthode analytique développée a été réalisée par HPLC : colonne Gravity C18 (152x4,6 mm, 5µm). La phase mobile était constituée de 80% de tampon phosphate (pH 3) et de 20% d’acétonitrile avec un débit de pompe de 2 ml.min-1. Le volume d’injection était de 10 µl. Une gamme d’étalonnage de T et N en mélange a été préparée : T (0.6 à 1.35 mg.ml^-1) et N (0.125 à 0.5625 mg.ml^-1). Six répétitions du dosage de chaque produit (T, N et le mélange T-N) ont été réalisées pour évaluer la répétabilité. Par la suite, 6 séries avec une alternance de manipulateur entre chaque série (1 série par jour, 3 manipulateurs distincts) ont permis de valider la fidélité intermédiaire. Des essais de dégradations forcées (DF) ont été réalisés afin de vérifier la détection d’éventuels produits de dégradation : hydrolyse acide (1N HCl, 60°C, 4h) et basique (1N NaOH, 60°C, 4h), oxydation (H2O2 à 3%, 60°C, 4h), lumière UV (365 nm, 4h).
Les temps de rétention (TR) de T et de N étaient respectivement de 6.39 min et 18.3 min. La méthode analytique s’est avérée linéaire sur la gamme d’étalonnage établie avec des coefficients de corrélation R > 0.999 pour N et T. Les paramètres de répétabilité (CV 0.04% pour T et 0.07% pour N) et de fidélité intermédiaire (CV 0.60% pour T et 0.37% pour N) ont été validés. Les essais de DF ont mis en évidence une sensibilité des 2 molécules à l’hydrolyse acide : 2 produits de dégradation (PD) observés pour T avec des temps de rétention relatif (TRR) de 0.79 et 4.99 et 1 pour N (TRR 0.65). En conditions oxydantes, des PD sont retrouvés avec un TRR de 1.18 (T) et 1.16 (N). Les autres tests de DF ne montrent pas de PD.
La méthode de dosage indicatrice de stabilité a été validée conformément aux recommandations du guide du GERPAC ³. La mise au point d’une méthode commune pour le dosage simultané de T et N, pour la réalisation d’une étude de stabilité, est un réel atout, permettant notamment d’optimiser le temps de manipulation.

¹ D’Huart. et al. Etude de stabilité physico-chimique d’une solution de néfopam et d’un mélange néfopam-dropéridol dilués en seringues polypropylène pour les services de soins intensifs. Hopipharm, 2019.
² Gu J. et al. Long term stability of Tramadol and Ketamine solutions for patient-controlled analgesia delivery. Med Sci Monit, 2015.
³ SFPC et GERPAC. Guide méthodologique des études de stabilité des préparations. 1ère édition, avril 2013.

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