Validation d’une méthode indicatrice de stabilité par HPLC-UV : pré-requis pour la réalisation d’une étude de stabilité d’une solution buvable d’isavuconazonium

Introduction
L’isavuconazole (ISA) est un antifongique triazolé indiqué dans les aspergilloses invasives et les mucormycoses pour les adultes et enfants de plus de 1 an. Le principe actif (ISA) est présent sous forme de prodrug (isavuconazonium, ISN) dans les spécialités pharmaceutiques. A ce jour, l’ISA est disponible sous deux formes : gélule 100 mg (40 mg non commercialisé) et poudre pour solution injectable. Le développement d’une préparation magistrale buvable à 10 mg/mL est envisagé pour répondre aux besoins des enfants (poids<37kg) et des patients ayant un capital veineux limité et/ou des problèmes de déglutition. L’objectif de l’étude est de mettre au point et valider une méthode indicatrice de stabilité par HPLC-UV pour permettre la réalisation de l’étude de stabilité de cette nouvelle préparation magistrale d’ISN.

Méthodes
Les conditions chromatographiques en phase inverse sont : une colonne NUCLEODUR C18 gravity (150x4,6mm ; 5μm) maintenue à 40°C et une phase mobile composée d’un mélange de méthanol et d’un tampon phosphate 16mM pH 4,2 (58-42% v/v) à un débit de 1mL/min. La détection et la quantification sont réalisées à 280nm. Une élution isocratique a été retenue pour les analyses de dégradation forcée (temps d’analyse de 40min). Pour optimiser la durée des autres analyses, une élution par gradient a été développée avec un plateau isocratique initial dans les mêmes conditions jusqu’à élution de l’ISN puis une augmentation de la force éluante et un retour aux conditions initiales (temps d’analyse de 16min).
Nous avons développé et validé une méthode HPLC-UV indicatrice de stabilité selon les recommandations ICH Q2 (R2). La validation consiste à vérifier la linéarité, justesse, fidélité (reproductibilité et répétabilité) et spécificité grâce à la dégradation forcée (sous diverses conditions de stress : acide, basique, oxydante, température, UV).

Résultats
La méthode indicatrice de stabilité est linéaire (R²=0,998), fidèle (CV de répétabilité <0,47%, CV de fidélité intermédiaire<2,04%) et juste (erreur relative comprise entre 0,27 et 4,52% sur les trois niveaux de contrôle).
L’étude de dégradation forcée a mis en évidence des produits de dégradation bien séparés de la molécule d’ISN. L’ISN est dégradée rapidement en solution à température ambiante et plus particulièrement en milieu basique. La spécialité injectable doit être conservée au réfrigérateur avant reconstitution et au congélateur après reconstitution.

Discussion-Conclusion
L’instabilité de l’ISN en solution à température ambiante et surtout en milieu basique oriente vers la formulation d’une suspension buvable à 10mg/mL exprimé en ISA dans un agent de suspension acide qui reste à valider. La méthode HPLC validée permettra d’étudier la stabilité de cette nouvelle formulation buvable d’ISN. A notre connaissance, aucune méthode d’analyse HPLC pour le dosage d’une formulation buvable d’ISN par HPLC n’est publiée.

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