Validation d’une méthode de conservation des géloses de sédimentation stérile au-delà des recommandations fabricants pour une utilisation en isotechnie

Contexte
L’utilisation de géloses de sédimentation (GS) a été envisagée pour la surveillance microbiologique de notre isolateur de classe A conformément aux BPP de 2007. Nous utilisons 2 des 10 géloses conditionnées en triple emballage stériles par campagne de production. Notre fournisseur ne garantissant plus leur fertilité au-delà de 2j dans ces conditions, l’utilisation d’une boite hermétique pourrait permettre de prolonger leur conservation sur 5j.

Objectif
Vérifier la fertilité des GS au-delà des 2j recommandés par le fournisseur grâce à un dispositif hermétique destiné initialement à la culture microbiologique en anaérobiose.

Matériel/Méthode
Les GS ont été disposées dans l’isolateur à température ambiante (22°C ± 2°C) au sein d’une boite hermétique (BD^® Gazpak EZ) (n=15) et hors isolateur (n=15) durant 5 jours après ouverture de l’emballage primaire, puis exposées 4h en air ambiant avant d’être ensemencées.
L’essai de fertilité a été réalisé avec 5 micro-organismes recommandés par la Pharmacopée Européenne et le test qualité du fabricant : 3 bactéries (Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus) et 2 fungi (Aspergillus brasiliensis, Candida albicans). Un faible inoculum (<100 UFC) a été ensemencé en triplicata. Des géloses fraîches ont été utilisées comme témoin pour calculer le taux de recouvrement des géloses (ratio nombre d’UFC GS test/nombre d’UFC GS témoin). La variation du poids des GS a été mesurée comme critère secondaire afin d’évaluer les pertes hydriques dans les géloses. Les variations observées ont été comparées grâce à un test de Student ( ≤ 0.05).

Résultats
Le taux de recouvrement moyen de chaque germe est supérieur à 70% avec P.aeruginosa = 158%, B.subtilis = 94%, S.aureus = 100%, A.brasiliensis = 83%, et C.albicans = 79%. Hors isolateur, une perte significative du poids moyen des GS est observée 5 jours après ouverture de l’emballage primaire (p = 0.02), contrairement à celles conservées dans la boite hermétique (p = 0.43). Cette perte de poids est également significative hors isolateur après exposition pendant 4h en air ambiant (p < 0.001), contrairement aux GS exposées à l’intérieur de l’isolateur (p = 0.43).

Discussion/Conclusion
Les résultats du test de fertilité sont conformes aux résultats attendu ce qui suggère que l’utilisation d’une boîte hermétique permet de conserver la fertilité des géloses 5 jours après ouverture de l’emballage primaire dans les conditions de notre étude.

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