Qualification d’une méthode indicatrice de stabilité pour la recherche des impuretés de l’Histidine 117,20 mg / 3 mL AP-HP

Le kit Histidine-Cuivre, produit par l’Agence Générale des Equipements et Produits de la Santé (AGEPS), est une préparation hospitalière utilisée dans le traitement de la maladie de Menkès. Bien que des informations sur la stabilité de l’histidine dans les ampoules soient déjà disponibles en interne comme dans la littérature, il est nécessaire de mener des études de dégradation forcée pour approfondir la connaissance du produit conformément aux recommandations ICHQ8. Ces études permettent de faciliter le processus de sous-traitance, en transférant efficacement les méthodes analytiques et des étapes clés de fabrication.

Les objectifs de cette étude sont d’identifier les voies de dégradation de l’Histidine, de produire des produits de dégradation (PDD) de la substance active afin de réévaluer la spécificité et de valider le caractère indicateur de stabilité de la méthode de recherche des PDD utilisée dans les études de stabilité.

Des études de dégradation forcée ont été menées en soumettant l’histidine à différents facteurs de stress en solution, selon la formule de la préparation hospitalière. Les stress appliqués comprenaient des conditions oxydatives telles que l’oxygénation avec du peroxyde d’hydrogène (H2O2) et l’induction de réactions radicalaires avec du monoperoxyphtalate de magnésium (MMPP), en présence ou non de catalyseurs métalliques (Fe II et Fe III), ainsi qu’une exposition à la lumière. Des stress hydrolytiques ont également été utilisés, en modifiant le pH avec des solutions acide (HCl) et alcaline (NaOH). Enfin, des stress thermiques ont été appliqués en exposant l’histidine à des températures supérieures à 50 °C. La recherche des impuretés est réalisée par chromatographie liquide haute performance (HPLC) en phase inverse avec un détecteur à diode (PDA) dans le domaine ultraviolet-visible.

La dégradation forcée de l’histidine entraîne un changement de couleur (incolore, jaune, brun). L’analyse HPLC-PDA révèle plusieurs pics correspondant à différents produits de dégradation (PDD). Quatre de ces PDD dépassent le seuil de 0,1% selon les normes ICHQ3B. Ils sont présents dans les deux environnements oxydatifs utilisés (MMPP et H2O2) et leur formation est renforcée par l’exposition à la lumière. De plus, la présence d’un milieu alcalin favorise la production de ces PDD en raison de la présence de groupements hydroxyle, confirmant ainsi la voie de production oxydative. Parmi les PDD identifiés dans la littérature, l’oxo-histidine, l’urée et l’asparagine sont les principaux décrits. Le 5-imidazol-carboxaldéhyde, moins connu, a présenté un temps de rétention similaire au deuxième pic le plus majoritaire parmi les quatre PDD. Les trois autres pics de PDD restent non identifiés à ce stade. Enfin, l’identification du 5-imidazo-carboxaldéhyde est confirmée par une analyse en chromatographie couplée à un spectromètre de masse.

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