Mise au point d’une méthode de dosage par électrophorèse capillaire de la spironolactone pour une suspension buvable à 5 mg/mL

La spironolactone (SPI) est utilisée chez l’enfant dans l’hyperaldostéronisme primaire, les états œdémateux et l’insuffisance cardiaque. L’objectif est de mettre à disposition une suspension buvable pour parer à l’indisponibilité de forme pédiatrique. Une étude bibliographique préalablement effectuée, a permis de choisir l’Inorpha^® comme véhicule de suspension. Cependant devant la difficulté de la remise en suspension de la SPI une formulation avec ajout de 0.25 % de gomme xanthane (GX) a été utilisé. L’objectif a été de développer et valider une méthode de dosage de la spironolactone par électrophorèse capillaire (EC).

Matériel/Méthode
Etant donné que la SPI est une molécule de pKa neutre, le mode d’EC par chromatographie électrocinétique micellaire (MEKC) a été appliqué. L’objectif était de pouvoir séparer la SPI de son principal produit de dégradation : la canrénone (CAN). L’optimisation de la méthode (résolution Rs, temps d’analyse) a été faite en variant les concentrations de sodium dodécylsulfate (SDS), borate, de solvants organiques (méthanol, acétonitrile) et le pH dans la solution d’électrolyte. La longueur effective du capillaire était de 56 cm. La détection a été faite en UV. Un étalon interne, l’hydrocortisone (100 µg/mL) a été utilisé.
La validation de la méthode reposait sur les référentiels de la SFSTP en établissant un profil d’exactitude sur 3 concentrations 70, 100 et 130 µg/mL dont les limites d’acceptabilité ont été définies à +/- 10% avec une proportion β à 95%. La limite de détection (LD) de la SPI et de la CAN ont été recherchées.

Résultats
Les conditions optimales pour le tampon électrophorétique ont été obtenues avec du SDS à 25 mM dans un mélange borate 50 mM / méthanol (85/15) à pH 9,0. Les autres conditions analytiques étaient une tension appliquée de 30 kV, une température régulée à 25°C, une pression d’injection de 50 mBar pendant 6 secondes. La longueur d’onde retenue pour le dosage de la SPI était de 242 nm. Dans ces conditions, la SPI et la CAN ont été séparées en 18 min avec un Rs à 4.78.
Les résultats obtenus ont permis d’obtenir un profil d’exactitude conforme aux limites fixées avec des taux de recouvrement compris entre 101,5 et 104,3%. Les coefficients de variation de répétabilité sont compris entre 1,1 et 1,8 % et de reproductibilité compris entre 1,9 et 2,4 %. La limite de détection pour la SPI a été de 1 µg/mL et pour la CAN 0,5 µg/mL.

Discussion/conclusion
L’utilisation d’une méthode MEKC permet le dosage de la SPI. C’est une méthode qui offre une alternative à la CLHP pour la libération des préparations hospitalières.
Les performances de la méthode semblent être appropriées pour effectuer une étude de la stabilité de la SPI dans l’Inorpha^® enrichi à 0,25 % de GX.