Les spectres d’anthracyclines passés au crible

Introduction
L’identification de 4 molécules d’anthracyclines : Epirubicine (EPI), Daunorubicine (DAUNO), Doxorubicine (DOXO) et Idarubicine (IDA), est non spécifique par analyse au spectrophotomètre QCRx^® (UV/Raman) obligeant à un contrôle visuel du flacon systématique. Afin d’améliorer ce contrôle, une analyse des spectres de ces molécules est menée en chromatographie liquide haute pression (HPLC) en fonction de la température et de la dérivation des spectres, dans l’objectif de vérifier si elles présentent des différences spectrales.

Matériels et méthodes
L’analyse est réalisée sur HPLC (Shimadzu Nexera X2^®) en injection directe puis détectée en UV-Visible (190-700nm). Une bibliothèque spectrale spécifique est élaborée selon le protocole suivant : 8 échantillons par anthracyclines diluées dans du NaCl 0.9% à concentration croissante, pour 3 températures (Ambiante-amb, +15°C, +10°C), et 3 modes dérivées (sans dérivée-SD, 1ère dérivée-1D et 2nde dérivée-2D). Des échantillons issus de la production de l’unité sont analysés par similarité aux spectres acquis avec la bibliothèque spectrale préenregistrée, à une ʎ de 210 à 700 nm. Une identification différente de l’échantillon permet de calculer le taux d’erreur (TE) par molécule. Le % de ressemblance est calculé en cas d’identification conforme (1er%), et jusqu’à non-conformité (2ème%). Les analyses statistiques sont réalisées sur Excel^® et XLStat^®.

Résultats
47 échantillons (DOXO=14, EPI = 14, DAUNO=8, IDA=7) ont été analysés pour un total de 383 données spectrales. Les TE toutes températures et dérivées confondues, obtenus sont : 22% pour DOXO, 40% pour EPI, 27% pour DAUNO et 5% pour IDA. L’analyse par sous-catégorie montre un TE pour IDA à 0% en amb et +15°C, quel que soit la dérivée du spectre et proche de 0% pour la DOXO pour les spectres à +10°C. Le TE est de 17% en amb pour les 3 dérivées de EPI et à +15°C en 1D et 2D de DAUNO. Un test du khi² n’a pas mis en évidence de différence significative du TE par molécule en fonction de la dérivée du spectre et de la température (p-value=0.169).
Un test d’ANOVA sur mesures répétées sur les échantillons d’IDA, a mis en évidence une différence significative entre le 1er% et le 2eme%. Le même test sur les données de DAUNO et DOXO-EPI, n’est en revanche pas significatif.

Discussion/Conclusion
L’analyse des données spectrales en HPLC des anthracyclines a permis de montrer un TE et une analyse statistique significative uniquement pour IDA, plus marqué en 1D et 2D, qui permettrait de s’affranchir d’un contrôle visuel du flacon. La plage de longueur d’onde du détecteur UV-Visible étant plus large que celui du QCRx^® (190-700nm vs 200-400nm), il n’est pas possible d’extrapoler les résultats à la méthode de contrôle actuellement en place. Une analyse complémentaire sur des longueurs d’ondes plus restreinte devra être mené. En revanche, pour la DOXO, EPI et DAUNO, un contrôle visuel du flacon reste nécessaire.

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