Étude de faisabilité du dosage des Endotoxines Bactériennes dans les préparations hospitalières de Glycérol 10% / Fructose 5%

Introduction
En 2023, nous avons initié la production de solutions injectables de glycérol/fructose (GF) à la demande des gastroentérologues, utilisées dans le cadre de l’excision de polypes intestinaux par endoscopie interventionnelle. L’objectif de cette étude est d’explorer et de tester la faisabilité de la mise en œuvre du dosage des endotoxines bactériennes (EB) pour compléter les contrôles de libération de ces préparations hospitalières.

Matériels et Méthodes
La méthode de référence utilisée est la méthode "colorimétrie cinétique" de la monographie 2.6.14 de la Pharmacopée Européenne (PE). Les mesures ont été effectuées avec un spectrophotomètre portable, Endosafe^® (Charles River). Cette méthode nécessite la détermination de deux facteurs : la concentration limite d’endotoxines (LE) dans les solutions produites et la dilution maximale significative (DMS). Afin d’explorer la répétabilité, quatre échantillons ont été testés : trois échantillons testés 7 jours après production et un échantillon testé 50 jours après production, dilués dans de l’eau pour préparations injectables (EPPI). La cartouche de mesure (Charles River) contient quatre puits de 25 µl analysés simultanément, dont deux puits sont utilisés pour les contrôles de conformité des mesures et deux pour le dosage des échantillons.

Résultats
Selon la PE, la LE varie en fonction de la voie d’administration des solutions. Les solutions GF sont administrées par voie sous-muqueuse au niveau rectal ou colique, considérée comme une voie parentérale. La LE est obtenue en divisant la dose seuil d’endotoxines par surface corporelle (100 UI/m²) par le volume de solution administrée. La LE choisie pour cette étude a été fixée à 1,75 UI/ml, correspondant à un patient de 70 kg avec une surface corporelle de 1,8 m², pour 100 ml de solution administrée. Le choix de la DMS implique de tenir compte de la limite de détection de l’appareil de mesure, qui varie de 0,05 à 5 UI/ml rapportée à cette DMS. Une dilution des échantillons au 25ème a été testée afin que la plus petite valeur détectable soit de 1,25 UI/ml, c’est-à-dire inférieure à la LE calculée de 1,75 UI/ml. Les contrôles de qualité des quatre échantillons sont conformes avec un taux de recouvrement entre 50 % et 200%. Les résultats obtenus sont "inférieurs à 1,25 UI/ml" avec un temps d’analyse de 15 minutes et environ 5 minutes de manipulation par échantillon.

Discussion / Conclusion
Les échantillons sont exempts d’endotoxines détectables au seuil de 1,25 UI/ml conformément aux recommandations de la PE. La mise en œuvre de ces tests semble prometteuse pour une application routinière dans notre centre hospitalier. Le dosage nécessite en effet un temps d’acquisition court et un équipement spécifique minimal supplémentaire. Il serait pertinent d’améliorer la méthode en ajoutant un contrôle positif pour garantir que les solutions de GF n’inhibent pas la réaction enzymatique étudiée.

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