Essai de stérilité par filtration sur membrane des collyres EDTA 0,1% : Essai d’applicabilité

Introduction
Les collyres d’edétate disodique (EDTA) dosés à 0,1% sont, par leurs propriétés chélatrices du calcium, indiqués dans le grattage des concrétions calcaires dans les kératopathies en bandelette. Conformément aux Bonnes Pratiques de Préparation cette préparation hospitalière (PH) est soumise à des contrôles libératoires incluant des contrôles physico-chimiques et microbiologiques. L’objectif de ce travail est de valider l’essai de stérilité en vérifiant l’applicabilité aux collyres EDTA.

Matériel & méthodes
La filtration sur membrane, méthode de référence, a été réalisée selon la Pharmacopée Européenne (PE 11e Ed.) (2.6.1) à l’aide de la pompe SteritestTM Symbio LFH (Merck-Millipore) et des canisters munis d’une membrane en ester de cellulose 0,45 µm (Merck-Millipore). Les six souches recommandées par la PE ; Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium sporogenes, Candida albicans et Aspergillus brasiliensis ont été testées. La filtration s’est déroulée en plusieurs étapes (pré-mouillage, filtration du collyre, rinçages et mise en contact avec le milieu de culture). Les inoculums ont été préparés à partir de Bioball^® SingleShot calibrées à 30 UFC (Biomérieux). Les paramètres de filtration (vitesses et volumes de rinçage) ont été fixés selon les recommandations du fournisseur. Les milieux de culture sont le thioglycolate (TG) pour S. aureus, P.aeruginosa et C.sporogenes et l’hydrolysat de caséine soja (HCS) pour B.subtilis, C.albicans et A.brasiliensis. Un témoin négatif a été réalisé par milieu. Après filtration, les canisters ont été incubés à 30-35°C pour le TG et à 20-25°C pour le HCS. Les bactéries et les levures ont été incubées respectivement 3 jours et 5 jours au maximum. L’essai d’applicabilité a été répété trois fois.

Résultats
L’activité bactériostatique de ce collyre liée à l’inhibition des polymérases par chélation du magnésium (Mg2+) est inhibée par simple rinçage. La croissance de l’ensemble des microorganismes a été observée dans le délai imparti. Les rapports d’identification par les laboratoires de bactériologie et mycologie ont isolé des pousses monomorphes dans chacun des canisters. A la fin des périodes d’incubation respectives, les témoins négatifs limpides témoignaient de l’absence de contamination microbienne.

Discussion - Conclusion
L’absence de caractère inhibiteur sur la croissance des pathogènes du collyre EDTA à 0.1% a ainsi été prouvé. L’essai d’applicabilité pour les collyres EDTA 0,1% réalisé selon la PE est validé et reproductible. Il permet donc la validation de l’essai de stérilité pour ces préparations. En routine, cette méthode pourra alors être utilisée pour contrôler l’absence de croissance microbienne permettant la libération de cette PH sur le plan microbiologique.

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