Essai de stérilité d’une solution de chlorhexidine à 0,05 % : optimisation du rinçage

Objectif
La production de lots stériles d’une préparation hospitalière de chlorhexidine (solution de lavage ophtalmique : 5 mL de digluconate de chlohexidine aqueuse stérile 0,2 % qsp 20 mL de glucose 5 %, conditionnée en seringue) requiert la réalisation d’un essai de stérilité. Selon la pharmacopée européenne (2.6.1), un essai d’applicabilité doit vérifier que le protocole de filtration/rinçage permet d’inhiber l’effet antiseptique de la chlorhexidine susceptible d’empêcher la pousse de microorganisme en cas de contamination. L’objectif est de valider l’applicabilité de l’essai de stérilité sur les solutions de chlorhexidine produites par notre unité.

Méthode
Essai de stérilité par filtration sur membrane, conformément à la pharmacopée européenne (2.6.1). Six souches de référence conditionnées en bioballs ont été utilisées (fournisseur Biomérieux, ref/lots : 56045/9514, 56024/9511, 56040/9385, 56029/9608, 56026/9480, 56022/9490, DLU : 04/10/2026).
La chlorhexidine a été filtrée à travers la membrane du Steritest (Low binding PVDF, 0,45 µm  ; fournisseur Millipore, ref TZHVAB210, lot F5HB82467, DLU 30/06/2027), puis rincée deux fois à l’eau peptonée (fournisseur ThermoFisher, ref BO0833Z, lot 4534965, DLU 08/01/2027). Un troisième rinçage a été fait avec un bouillon peptone caséine lécithine polysorbate (fournisseur Millipore, ref 146495, lot 252518, DLU 02/04/2026). La lécithine et le polysorbate permettant d’inactiver l’effet antiseptique de la chlorhexidine.
De l’eau peptonée ensemencée avec 30 UFC de chacune des souches de microorganisme a ensuite été filtrée. Un milieu thioglycolate (fournisseur Biomérieux, ref 44021, lot 2549800, DLU 28/10/2026) a été ajouté dans un flacon puis incubé en étuve à 30°C, et un milieu trypcase-soja (fournisseur Biomérieux, ref 44011, lot 2567220, DLU 13/06/2027) a été ajouté dans l’autre flacon puis incubé à température ambiante. Les résultats ont été lus à J1, J2 et J5 par un technicien de laboratoire.

Résultats
Croissance microbienne observée dans tous les flacons en moins de cinq jours, conformément au critère de positivité de la pharmacopée européenne. L’identification microbiologique par MALDI-TOF confirme la présence exclusive de la souche ensemencée dans chaque flacon, sans contamination exogène.

Discussion - conclusion
L’essai d’applicabilité valide le protocole de stérilité pour les six souches requises. Le protocole de rinçage, est donc efficace pour neutraliser l’effet antiseptique de la chlorhexidine. Ces résultats montrent que la méthode de stérilité par filtration sur membrane est adaptée au contrôle microbiologique des lots produits. La méthode peut donc être utilisée en routine pour la libération pharmaceutique de ces préparations stériles. Cette préparation fera l’objet d’un dépôt de dossier médicament expérimental dans le cadre d’un essai clinique dans notre centre.

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