Développement et validation d’une méthode de dosage du Topiramate par chromatographie liquide haute performance couplée à un détecteur à aérosols chargés (HPLC-CAD)

Contexte
Le Topiramate (TPR) est un antiépileptique à large spectre indiqué dans la prise en charge de l’épilepsie de l’enfant et de l’adulte. Devant l’absence de formulation adaptée à la population pédiatrique, notre établissement souhaite formuler une suspension buvable de TPR à 6mg/mL. Cette substance active étant dépourvue de groupement chromophore, l’utilisation des méthodes de détection habituelles par spectrophotométrie UV-visible n’est pas envisageable.

Objectifs
Mettre au point une méthode de dosage indicatrice de stabilité par HPLC-CAD pour le contrôle qualité des suspensions buvables de TPR. La méthode doit permettre de séparer efficacement le TPR de ses impuretés majoritaires (A et E) décrites par la Pharmacopée Européenne, qui sont aussi ses principaux produits de dégradations.

Matériels et méthode
La mise au point de la méthode de dosage s’est déroulée en quatre étapes : revue de la littérature ; choix des phases stationnaire et mobile ; réglage de l’appareillage ; évaluation de l’effet matrice. Le système chromatographique était composé d’une chaîne HPLC Vanquish Thermofisher Scientific^® couplée à un détecteur à aérosols chargés (CAD, VF-D20A). La méthode de dosage du TPR a été validée conformément aux recommandations de l’ICH Q2. La validation s’est déroulée sur trois jours, avec trois gammes de cinq points (0,05 – 0,15 mg/ml) et trois niveaux de contrôles (0,08 ; 0,1 et 0,12 mg/ml) préparés séparément par trois opérateurs différents.

Résultats
La séparation a été effectuée sur une colonne Agilent^® Zorbax Eclipse XDB-C18 (4.6 x 250 mm, 5 µm) thermostatée à 30°C avec une pression observée à 170 bar. La phase mobile consistait en un mélange Eau/Méthanol 50/50. Les échantillons ont été élués selon un mode isocratique à un débit de 1ml/min et avec un volume d’injection de 20 µl. La température d’évaporation du détecteur (CAD) était maintenue à 35°C. Le temps de rétention du TPR était de 8,3 min. La courbe d’étalonnage montrait une linéarité entre 0,05 et 0,15 mg/ml avec un coefficient de corrélation R² = 0,99. Les coefficients de variation de répétabilité et de fidélité intermédiaire étaient respectivement de 0,73 % et 4,0 %. Le profil d’exactitude a montré un recouvrement moyen est de 101,13 % (IC95% = [100,15 ; 102,12 %]). Aucune interférence avec les impuretés A et E, ni d’effet matrice avec les excipients n’ont été mis en évidence.

Discussion/Conclusion
La méthode de dosage du TPR par HPLC-CAD validée est exacte, fidèle et répétable. Son utilisation contribuera à l’étude de stabilité physicochimique de suspensions buvables de TPR formulées afin de déterminer leur péremption ainsi que les modalités de conservation.

Voir le poster