Développement et validation d’une méthode de contrôle analytique du letermovir par chromatographie en phase liquide à haute performance couplée à l’UV-visible (HPLC-UV) au sein d’une unité de préparation de chimiothérapies (UPC)

Introduction
Le letermovir est un antiviral indiqué dans la prophylaxie de la réactivation du cytomégalovirus (CMV) et de la maladie à CMV chez les adultes séropositifs au CMV receveurs d’une greffe allogénique de cellules souches hématopoïétiques, aux doses fixes de 480 mg (sans co-prescription de ciclosporine) ou 240 mg (avec co-prescription de ciclosporine).
Afin de sécuriser sa préparation au sein de l’UPC, un contrôle analytique qualitatif et quantitatif libératoire du letermovir est mis en place par HPLC couplée à un détecteur UV-visible.

Matériel et méthode
Le letermovir est une solution prête à l’emploi de 20 mg/ml, à diluer dans une poche de NaCl 0,9% de 250 mL, amenant à deux concentrations possibles (en tenant compte d’un sur-remplissage de 18 ml des poches) : 0,9 mg/ml et 1,8 mg/ml.
Le contrôle analytique du letermovir est mis en place sur HPLC-UV par injection directe FIA (Flow Injection Analysis). Les conditions d’analyses sont : une longueur d’onde λ à 260 nm, une phase mobile eau 50% / acétonitrile 50%, et un débit de 1,5 ml/min pour un volume d’injection de 30 µL. Le temps d’analyse est de 0,3 min et la température de 20°C.
Une gamme d’étalonnage de 5 points (0,6 ; 1,0 ; 1,4 ; 1,8 ; 2,0 mg/ml) est réalisée sur 3 jours différents et associée à quatre points de contrôle qualité (0,6 ; 0,9 ; 1,2 ; 1,6 mg/ml) répétés 3 fois. La validation de la méthode est effectuée conformément à la directive internationale International Council for Harmonisation (ICH) Q2 (R1) en utilisant les critères suivants : linéarité, exactitude (justesse), répétabilité (précision intra-analyse) et fidélité intermédiaire (précision intermédiaire inter-jour).

Résultats
La méthode analytique est linéaire pour une gamme de concentrations de 0,6 à 2,0 mg/L, avec un coefficient de corrélation supérieur à 0,95 (R² = 0,9995). Elle est également précise, avec des coefficients de variation obtenus lors des études de répétabilité et fidélité intermédiaire inférieurs à 5 % et 8 % : respectivement 1,3 % et 2,0 %. Enfin, la méthode est exacte avec un taux de recouvrement compris entre 97,0% et 99,9% (>90%).

Discussion et conclusion
La méthode a été validée selon les critères de la directive internationale ICH Q2 (R1). Celle-ci est linéaire, précise (répétable et fidèle) et exacte. Le contrôle analytique du letermovir a ainsi pu être déployé en routine au sein de notre UPC afin de sécuriser le circuit de préparation. Le développement et la validation de la méthode de contrôle analytique par spectrométrie UV-Raman (QCRx^®) a également été mis en place.

Voir le poster