Développement et validation d’une méthode analytique indicatrice de stabilité pour l’étude de la stabilité physico-chimique de gélules d’amoxicilline/acide clavulanique destinées à des tests de provocation orale

Introduction
L’amoxicilline (A) et l’acide clavulanique (Ac) figurent parmi les antibiotiques pour lesquels la prévalence d’hypersensibilité suspectée demeure élevée. Dans un but diagnostic, des tests de provocation orale (TPO) sont réalisés à l’hôpital. Actuellement, des gélules sont produites par la pharmacie à usage intérieur avec une date limite d’utilisation d’un mois (M) (préparations magistrales à partir de comprimés d’A/Ac 500 mg/62,5 mg broyés et lactose monohydraté, de taille n°2 en blisters non opaques). Face à une hausse des demandes, le service clinique concerné souhaiterait une préparation hospitalière en dotation.

L’objectif de ce travail était de développer une méthode indicatrice de stabilité des deux principes actifs (PA) puis d’évaluer leur stabilité physico-chimique dans les gélules à température ambiante et à l’obscurité.

Matériels et méthodes
La méthode indicatrice de stabilité des deux PA a été développée à l’aide d’une étude de dégradation forcée par chromatographie liquide haute performance couplée à une détection UV à barrette de diodes (CLHP-DAD) à l’aide d’une colonne C18 (100x2,1 mm, 2,6 µm) et d’une phase mobile tampon phosphate pH2 25 mM/MeOH 99/1 (%v/v). La validation a été réalisée selon les référentiels SFSTP et ICHQ2. Les profils d’exactitude ont été établis pour chaque PA. La stabilité physico-chimique a été évaluée pour deux formulations (A/Ac : 100/12,5 mg et 10/1,25 mg). L’évaluation de la teneur (moyenne ± écart-type) des PA et la recherche des produits de dégradation a été réalisée à Jour(J)0, J7, J14, M1 et M2.

Résultats
La méthode de 20 min validée sépare l’Ac (tR=2,8 min), l’A (tR=9,9 min) et leurs produits de dégradation potentiels. Aucune modification des spectres dérivés premières aux tR de l’Ac et de l’A n’a été observée durant l’étude de dégradation forcée, renforçant la sélectivité de la méthode. Afin d’éviter l’hydrolyse de l’Ac en milieu acide tout en permettant la solubilisation de l’amoxicilline, le pH du milieu de solubilisation, tampon phosphate de 25 mM/ MeOH 99/1 (%v/v) a été fixé à 5,5. Le ratio A/Ac (10:1) a nécessité, après mise en solution des gélules, une étape de dilution propre à l’analyse de chaque PA, en accord avec les gammes d’étalonnage. Elle permettait leur bonne détection tout en évitant la saturation du signal. À M2, les gélules 100 mg (A) /12,5 mg (Ac) demeuraient stables (100,77 ± 4,20 % /101,72% ± 4,05 %) alors qu’une instabilité de l‘Ac était démontrée pour les gélules 10 mg (A)/1,25 mg (Ac) (97,28% ± 4,10/82,35 ± 1,60 %).

Discussion/conclusion
La méthode analytique indicatrice de stabilité développée a permis la mise en évidence d’une instabilité à M2 des gélules 10 (A)/1,25 mg (Ac), dont l’origine est à identifier. L’évaluation de la stabilité des gélules 100 (A)/12,5 mg (Ac) sera poursuivi à M3. Cette étude souligne l’intérêt d’étudier la stabilité des préparations magistrales incluant des principes actifs labiles.

Mots-clés : stabilité médicamenteuse, association amoxicilline-clavulanate de potassium, chromatographie en phase liquide haute performance

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