Centralisation de la production de mélanges vitamino-lipidiques : validation de la méthode alternative Bactec^® pour l’essai de stérilité

Contexte
Les Mélanges Vitamino-Lipidiques (MVL) sont des préparations stériles utilisées pour la supplémentation nutritionnelle des nouveau-nés prématurés. L’activité de production des seringues de MVL, auparavant réalisée au sein des services de soins, a récemment été centralisée au sein du secteur de Pharmacotechnie. Dans ce cadre, un contrôle microbiologique par filtration sur membrane a été validé. Cette technique nécessite un temps d’incubation prolongé, incompatible avec la stabilité limitée (7 jours) des MVL, rendant ainsi son application difficile en routine. L’objectif de ce travail est de valider la méthode alternative par Bactec^® (automate d’hémoculture) pour le contrôle microbiologique des MVL produits en centralisé, afin d’optimiser les délais de libération tout en garantissant la conformité des exigences réglementaires.

Matériels et méthodes
Des manipulations ont été effectuées afin de valider les essais de stérilité, de fertilité, et d’applicabilité de la méthode Bactec^® selon les exigences de la Pharmacopée Européenne (PE) (2.6.1 Stérilité & 5.1.6 Méthode alternative). D’autres paramètres ont également été testés : spécificité, robustesse, limites de détection, et sensibilité. Les manipulations ont été réalisées pour les 6 souches microbiennes définies par la PE (C. sporogenes, P. aeruginosa, S. aureus, A. brasiliensis, B. subtilis et C. albicans) à 50 UFC et 10 UFC, avec 3 répétitions par 3 opérateurs différents, sur 3 jours différents, en incluant des témoins positifs et négatifs pour chaque série d’essais. Les cultures ont été incubées dans l’automate à 35 °C jusqu’à positivation des flacons.

Résultats
Les temps de positivation observés étaient compris entre 11h et 83h, et 100% des inocula testés ont été détectés. En moyenne, les cultures des souches bactériennes se sont positivées en 15h, et respectivement en 24h et 48h pour C. albicans et A. brasiliensis. Les croissances étaient équivalentes entre les milieux de MVL et les témoins positifs. Les témoins négatifs n’ont pas montré de contamination microbienne après 5 jours d’incubation. L’identification des microorganismes présents dans les milieux était cohérente avec les souches ensemencées. La robustesse et les limites de détection de la méthode ont été testées en faisant varier respectivement le volume d’ensemencement (5 mL vs 10 mL) et la quantité de microorganismes contaminants (10 UFC vs 50 UFC), sans impact sur les performances de la méthode, tant en termes de taux de détection que de délai de positivation.

Discussion – Conclusion
Les différents paramètres testés ont permis de montrer l’équivalence de la méthode Bactec^® selon les critères de la PE. Cette méthode constitue une alternative pertinente à la filtration sur membrane, avec une sensibilité et des délais de détection compatibles avec une utilisation en routine.

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