Analyse du risque d’aérosolisation des bacteriophages lors de manipulations sous poste de sécurité microbiologique
5 octobre 2022
B. Lapras1,4,C. Moreau1, M. Medina2,4, C. Marchand1,4, C. Merienne1,4, C. Kolenda2,4, T. Briot3,4, G. Leboucher3,4, F. Laurent2,4, F. Pirot1,41 Plateforme FRIPHARM, Pharmacie à usage intérieur, Groupement Hospitalier Centre - Hospices Civils de Lyon (HCL)
2 Laboratoire de bactériologie, Centre national de référence des staphylocoques – Hospices Civils de Lyon
3 Pharmacie à usage intérieur, Groupement Hospitalier Nord – Hospices Civils de Lyon
4 Consortium PHAG-ONE – PHAGinLyon
Introduction
La manipulation de bactériophages (phages) sous poste de sécurité microbiologique (PSM) en conditions stériles peut impliquer notamment des procédés de concentration, purification, dilution, mélange et remplissage aseptique. Ces opérations, réalisées de préférence dans des atmosphères contrôlées de classe A, sont susceptibles de contaminer par aérosolisation des équipements, des locaux et du personnel.
Objectif
Dans cette étude, nous rapportons des travaux évaluant l’aérosolisation des phages sous PSM.
Matériels et méthodes
L’aérosolisation de BP anti-Staphylococcus aureus produits par les HCL, appartenant à la famille des Myoviridae, a été étudiée sous un PSM de Classe II. Trois boîtes de Petri (de 144 cm²), remplies de 25 mL de milieu de culture liquide Trypto Ceaséine Soja, ont été placées en diagonale sous le PSM afin de couvrir un quart de la surface du plan de travail. Des flacons stériles remplis d’une suspension de phages (1010 PFU/mL) ont été disposés sous le PSM pendant 20 minutes avec : (i) un flacon maintenu ouvert sous PSM, (ii) un flacon fermé agité pendant 5 minutes puis laissé ouvert. Un contrôle négatif (milieu de culture non exposé aux phages) et positif (suspension phagique diluée dans du milieu de culture) ont complété l’essai.
A la fin de l’essai, les milieux de culture (non mélangés) ont été inoculés avec une souche de Staphylococcus aureus pendant 18 h, puis ont été centrifugés pour séparer les phages et les bactéries. Le surnageant a été titré afin de déterminer la concentration en phages actifs.
Résultats et discussion
Les résultats ont mis en évidence une contamination phagique par aérosolisation pour l’essai avec le flacon agité et le contrôle positif (titre à 109 PFU/mL). Il a été noté que dans le cas du flacon agité, seules les boîtes de pétri dans un rayon de 20 cm autour du flacon agité présentaient une contamination phagique par aérosolisation. Aucune contamination n’a été observée ni pour le flacon non agité, ni pour le contrôle négatif (absence de lyse).
Ces données suggèrent que les particules de phages aérosolisées sont plaquées par le flux à la surface du plan de travail du PSM et que l’aérosolisation après agitation reste locale. D’autre part, dans les conditions normales d’utilisation des phages (production, préparation), la probabilité d’agitation intense et d’ouverture prolongée des contenants étant limitée, le risque de contamination par aérosolisation apparaît faible.
Conclusion
La méthodologie appliquée ne met pas en évidence de contamination croisée par aérosolisation des phages sous un PSM dans le cadre d’une manipulation raisonnée d’une suspension de phages à usage thérapeutique.