Validation d’une méthode alternative de contrôle de la stérilité des mélanges de nutrition parentérale (MNP)

Les MNP sont des préparations réalisées en milieu aseptique. Il est indispensable de garantir la stérilité du produit fini par la réalisation d’essais de stérilité. Les méthodes de référence proposées par la Pharmacopée Européenne sont la filtration sur membrane et l’ensemencement direct. Le BACT/ALERT^®VIRTUO^® (Biomérieux) est une méthode microbiologique alternative qui permet une détection indirecte de la croissance bactérienne par détection de la production de CO2, avec un rendu de résultats plus rapide, et une sensibilité augmentée par rapport aux méthodes de référence.

L’objectif ici est de valider une méthode microbiologique rapide au BACT/ALERT^®VIRTUO^® pour la réalisation de l’essai de stérilité en routine.

Les milieux d’incubation utilisés sont des flacons à hémoculture aérobie (FA+) et anaérobie (FN+). Après s’être assuré de la fertilité des milieux d’incubation, le test d’applicabilité de la méthode a été réalisé, à partir d’une poche de MNP de formule standard utilisée sur l’établissement. Des souches calibrées de Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium sporogenes, Aspergillus brasiliensis, Candida albicans (Bioball Single Shot^®) ont été utilisées pour les différentes étapes. Celles-ci ont été mises en solution et diluées à 5 UFC/ml avant utilisation. Un test de croissance a été effectué sur chacun flacons à hémoculture utilisés. Pour chaque germe, 3 paires d’échantillons ont été inoculées avec 1 ml de solution de MO et 3 ml de MNP, une paire de témoin positif avec 1 ml de MO et 3 ml d’eau PPI et une paire de témoin négatif avec 4 ml d’eau PPI. Ils ont été mis à incuber dans le BACT/ALERT^®VIRTUO^® pour une durée de 5 jours à 35°C. Les flacons positifs ont été ensemencés sur géloses Cos et PVX, puis lus et identifiés au MALDI-TOF Biotyper^® après 24h d’incubation à l’étuve. Pour les moisissures et levures, les subcultures effectuées sur géloses Can2 ont été lues 48h plus tard.

Pour chaque MO, aucune croissance n’a été détectée pour les témoins négatifs. Une croissance a été observée dans flacons les témoins positifs démontrant une absence d’effet inhibiteur des MNP. Le BACT/ALERT^®VIRTUO^® a détecté une croissance dans l’ensemble des échantillons avec un délai variant de 15h à 3j pour les MO à croissance lente. Le MALDI-TOF Biotyper^® et les géloses Can 2 (pour les moisissures et levures) ont permis de confirmer que les MO détectés correspondaient à ceux inoculés.

Ces résultats permettent valider de la méthode BACT/ALERT^®VIRTUO^® pour le contrôle de la qualité microbiologique des produits finis. Celle-ci va ensuite être appliquée sur une production test avant le démarrage de la production et son utilisation en routine.

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