Développement d’une méthode UPLC–MS/MS appliquée à une étude pharmacocinétique de deux inhibiteurs de récepteurs à domaine discoïdine : évaluation du passage de la barrière hémato-encéphalique

Les récepteurs à domaine discoïdine 2 (DDR2) ont émergé comme de nouvelles cibles pharmacologiques dans le glioblastome, en raison de leur surexpression dans les cellules tumorales. Deux inhibiteurs de tyrosine kinase, le WRG-28 et le DDR2-IN-1, ciblent sélectivement ce récepteur. Toutefois, leur efficacité thérapeutique dépend de leur capacité à traverser la barrière hémato-encéphalique (BHE). En l’absence de méthodes analytiques, leurs profils pharmacocinétiques et de pénétration au travers de la BHE sont inexplorés. Dans cette étude, une méthode UPLC-MS/MS a été développée pour la quantification simultanée du WRG-28 et du DDR2-IN-1 dans le plasma et le cerveau murins, selon les recommandations de l’Agence Européenne du Médicament. Les analytes ont été extraits par une simple précipitation protéique au méthanol, suivie d’une étape d’élimination des lipides. Ils ont ensuite été séparés par chromatographie liquide, utilisant comme phase mobile de l’eau contenant 0,05 % d’acide formique et de l’acétonitrile contenant 0,1 % d’acide formique, en mode gradient. L’ionisation a été réalisée en mode électrospray positif, couplée au suivi de réactions multiples (MRM) avec les transitions m/z 411.1→134.1 et 411.1→198.1 pour le WRG-28, et 526.2→255.1 et 526.2→72.1 pour le DDR2-IN-1. La plupart des critères de validation ont été respectés, incluant la sélectivité, la spécificité, la linéarité, la précision et l’exactitude, l’intégrité des dilutions, la stabilité et la reproductibilité des réinjections. La gamme de calibration était linéaire de 1 à 1000 ng/mL pour les deux composés. La méthode a été validée avec succès et appliquée à des études pharmacocinétiques précliniques. Elle a permis d’évaluer le passage à travers la BHE des deux inhibiteurs de DDR2.