Contrôle de stérilité de préparations hospitalières d’anticorps monoclonaux et d’anticancéreux : validation de méthode avec automate BACTEC™

Introduction
La pharmacie à usage intérieur réalise des préparations d’Anticorps Monoclonaux (AcM) et d’anticancéreux stériles. Conformément à la Pharmacopée Européenne (PE), ces préparations hospitalières doivent faire l’objet d’un contrôle de stérilité. La méthode de référence, reposant sur une incubation à 14 jours, est contraignante, notamment pour des préparations à péremption de 30 jours. L’objectif est de valider une méthode rapide de contrôle de stérilité en utilisant l’automate d’hémocultures BACTEC™, afin de disposer d’une alternative adaptée aux préparations à stabilité limitée.

Matériels et méthodes
Les préparations évaluées sont le pembrolizumab (200 mg), le nivolumab (240 mg et 480 mg), le rituximab (600 mg, 700 mg et 800 mg), la cytarabine (100 mg), le paclitaxel (90 mg, 120 mg et 150 mg). Les solvants étudiés sont : NaCl 0,9% et glucose 5%. Les MicroOrganismes (MO) de référence de la PE sont P. aeruginosa, B. subtilis, A. brasiliensis, S. aureus, C. sporogenes, et C. albicans. Les milieux de culture utilisés sont les flacons BACTEC Plus Aerobic/F (FA) pour les souches aérobies et BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F (FN) pour les souches anaérobies. Chaque échantillon de préparation de 1 ml est contaminée par 5 unités formant colonies par ml puis inoculée dans un flacon, en triple exemplaire, avant incubation. Des tests négatifs (solvant seul, spécialité seule) et des tests positifs (solvant + MO) sont réalisés. Les tests ont été incubés à 35°C pendant 5 jours dans l’automate BACTEC™.

Résultats
L’ensemble des flacons contaminés sont détectés positif par le système BACTEC™. Les Temps de Positivité (TP) variaient de 2h48 à 10h35, à l’exception de ceux inoculés d’A. brasiliensis, dont la croissance plus lente avec des TP compris entre 19h07 et 34h10. Pour chaque MO testé, les TP observés dans les préparations étaient comparables à ceux obtenus dans les solvants seuls, indépendamment de la concentration évaluée. L’ensemble des tests positifs se sont positivés, traduisant l’absence d’effet inhibiteur des médicaments testés. Par ailleurs, aucun faux positif n’a été observé et l’ensemble des tests négatifs sont restés négatifs après 5 jours d’incubation. Ces résultats permettent de valider la méthode de contrôle de stérilité pour l’ensemble des médicaments et concentrations évalués, avec une détection obtenue en moins de 48 heures.

Discussion et conclusion
La méthode alternative utilisant le système BACTEC™ permet d’automatiser et de simplifier le contrôle de stérilité des préparations hospitalières tout en réduisant considérablement le délai d’obtention des résultats, de 14 jours avec la méthode de référence à 2 jours pour les préparations étudiées. Cette approche constitue une alternative pertinente pour accélérer la libération des préparations tout en garantissant leur sécurité microbiologique.

Mots clés : anticorps monoclonaux, pharmacopée, techniques microbiologiques

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