Contrôle de stérilité de collyres acqueux et huileux par automate Bactec^® : faisabilité et validation

Introduction
Notre PUI réalise des préparations hospitalières de collyres, à base d’excipients aqueux ou huileux. Ces collyres son utilisés immédiatement après leur fabrication sur la foi d’une libération paramétrique, l’essai de stérilité prescrit par la pharmacopée européenne (PE) nécessitant 14 jours d’incubation. L’objectif de ce travail est de valider une technique rapide de contrôle de stérilité de ces collyres en utilisant la technologie Bactec^® basée sur la détection de la production de CO₂ (MDC) avec virage colorimétrique en cas de pousse.

Matériel et méthode
2 séries (n=6) de préparations de collyres (9,9 mL/flacon) ont été réalisées dans en conditions aseptiques sans rajout principes actifs : collyres aqueux (COA) à base de NaCl 0,9% et collyres huileux (COE) à base d’huile de ricin. 6 microorganismes de référence ATCC (Bioball^®, 550UFC/Unité) : S. aureus (G1), P. aeruginosa (G2), C. sporogenes (G3), B. subtilis (G4), A. brasiliensis (G5) et C. albicans (G6)), recommandés par la PE, remis en solution du NaCl0,9%, ont été utilisés pour les études de validation. Les préparations ont été enrichies avec 100µL de chaque solution de germe de référence (concentration finale 1UFC/mL). Des aliquots de 3mL de collyre (3UFC) ont été introduits dans 3 différents milieux MDC : BACTEC Peds (B1, milieu aérobie), BACTEC™ Plus Anaerobic (B2) et BACTEC Plastic Mycosis IC/F (B3, champignons filamenteux), puis mis en culture dans un incubateur BD Bactec Fx40. Des aliquots identiques ont été mis en culture dans les milieux prescrits par la PE : bouillons Tryptone Soja (TSB) et au thioglycolate (TB). Pour les COE, des aliquots de 3mL ont bénéficié d’une filtration sur membrane 0,22µm (FM) puis transfert du filtre sur une gélose Count-tact^®. 2 paramètres ont été évalués : détection ou non du germe (lecture sur 5 jours minimum) et temps pour obtenir un résultat positif (temps de détection ou TDD).

Résultat et discussion
Les milieux B1 et B3 ont détecté les germes présents sauf G3 (anaérobie). G3 a été difficilement détectable sur TB et en FM mais détecté par le milieu B2. Avec la MDC, G5 a été détecté tant avec B1 que B3. Ainsi, le milieu B1 a été suffisant pour détecter les germes aérobies et les champignons filamenteux tant avec les COA que les COE, et B2 pour les germes anaérobies. La détection de tous les germes a été plus rapide avec la MDC, dans tous les cas <24h quelle que soit la matrice, avec des TDD allant de 7h02’±18’ pour G5 en milieux aqueux à 18h21’±29’ pour G3 en milieux huileux. Avec les techniques de référence PE, la détection a nécessité entre 3 et 5 jours d’incubation pour avoir un résultat positif.

Conclusion
La technique MDC a permis une détection rapide des germes de références présents dans les collyres, aqueux ou huileux, avec une limite de détection faible (1UFC/mL) et un faible nombre total d’UFC incubés (3 UFC). Les performances de la technique sont meilleures que les techniques de référence : rapide <24h, répétable, sensible et couvre l’ensemble des germes utilisés, ce qui permettra une libération sous 24h des préparations hospitalières de collyres.

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