Validation de la méthode BacT/Alert® pour le contrôle microbiologique des poches de nutrition parentérale pédiatrique (NPP)

C. Le Roy1, E. Bermudez1, N. Carre1, C. Chanat1, C. Castelain1, H. Poutet2, M.L. Brunet1, F. Chastv 1 Pharmacy department
2 Bacteriology department
Hôpitaux Universitaires Paris Centre Cochin Broca Hôtel-Dieu,
27 rue du Faubourg-Saint-Jacques, 75014 Paris, France

Introduction 

L’unité de NPP prépare quotidiennement une poche test de mélange binaire (MB) représentative du lot pour réaliser un essai de stérilité (ES). La Pharmacopée Européenne (PE) recommande la technique de filtration sur membrane : méthode Steritest®, utilisée actuellement. Une méthode alternative : BacT/Alert®, présente un grand intérêt. A partir de la poche test nous avons procédé, selon la PE, à un essai d’applicabilité (EA) des 2 techniques afin de comparer leur efficacité.

Matériels & méthode 

Conformément à la PE, l’EA consiste au transfert du MB dans 3 paires d’échantillons ensemencés chacun avec 5 UFC pour chaque micro-organisme : S. aureus, B. subtilis, P. aeruginosa, C. sporogenes, C. albicans et A. brasiliensis. Dans chaque paire de canisters Steritest® 50 ml de la poche test sont filtrés (milieu au thioglycolate et milieu à l’hydrolysat de caséine et soja). Les flacons BacT/Alert® étant prêts à l’emploi, 3 ml de MB sont injectés dans le milieu aérobie et 4 ml dans le milieu anaérobie. La lecture des canisters est quotidienne, celle des flacons BacT/Alert® automatique, toutes les 10 min. L’incubation a duré 5 jours. Après positivation le germe est isolé sur gélose et identifié par spectrométrie de masse MALDI-TOF.

Résultats & discussion 

Pour les 2 méthodes, la totalité des échantillons attendus positifs le sont dans l’intervalle de 5 jours préconisé par la PE. Isolement et identification confirment que seul le germe ensemencé est présent. Avec la méthode BacT/Alert® la manipulation est plus rapide et nécessite moins de matériel. La lecture des flacons toutes les 10 min est associée au déclenchement d’une alarme immédiate en cas de flacon positif.

Conclusion 

La méthode BacT/Alert® est retenue pour l’ES quotidien. En routine, pour être conforme à la PE, l’ES est réalisé à partir d’une poche test de 150 ml, de laquelle 21 ml sont répartis en 3 paires de flacons à raison de 3 ml en milieu aérobie et 4 ml en milieu anaérobie. Une incubation de 14 jours est respectée.

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