Essai de stérilité des préparations ophtalmiques sur milieu solide R2A

M. Saliège1, E. Thibert1, F. Chapelle2, V. Sautou1, O. Traoré2, J. Chopineau1 1 Service Pharmacie, CHU Clermont-Ferrand
2 Laboratoire Hygiène Hospitalière, CHU Clermont-Ferrand

L’essai de stérilité de la Pharmacopée Européenne (Ph. Eur. 7ème éd, ch. 2.6.1) requiert 2 milieux de culture liquides (Trypticase Soja (TS) et Sabouraud (SG2)) et des temps d’incubation longs (14 jours). Le milieu solide R2A est un milieu adapté aux germes stressés. Nous avons voulu savoir si R2A, préconisé pour les contrôles d’eau d’hémodialyse, était adapté au contrôle des préparations ophtalmiques. L’objectif de ce travail est donc de valider le milieu R2A versus les milieux recommandés par la Ph. Eur.

Les souches utilisées sont celles de la Ph. Eur. Sept préparations anti-infectieuses et une d’immunosuppresseur sont testées en comparant les milieux TS et SG2 versus R2A. La filtration sur membrane (nitrate de cellulose, 0.45µm) s’opère en système ouvert sous hotte à flux laminaire verticale. La fertilité de R2A et la méthode de filtration sont étudiées. Le choix de la solution de rinçage (eau, NaCl ou Letheen) et de son volume (500 ou 100 ml) sont déterminés par l’étude du principe actif et la galénique de la préparation. La lecture des résultats s’effectue à 3 jours (J3) après incubation à 37°C, 30°C ou 25°C selon les types de germe mais aussi du milieu de culture. Les essais sont réalisés en triplicat et en parallèle sur des témoins.

R2A révèle tous les germes à J3. Il est équivalent aux autres milieux. (Pour les bactéries : écart relatif (ER) < 20% et Coefficient Variation (CV) < 12%. Pour les champignons : ER< 9% et CV< 8,7%). La méthode de filtration sur membrane est validée et reproductible. Les ER sont similaires entre chaque test et pour chaque germe (S. aureus : ER1 = 6,62% ER2= 7,33% et ER3= 6,8%). L’activité antimicrobienne des préparations est inhibée par le rinçage, seul l’Amphotéricine B garde ses propriétés antifongiques tant en milieu liquide que sur R2A.

Ce procédé est utilisé en routine. Le délai d’obtention des résultats (J3) permet par rapport à la méthode de la Ph Eur de libérer plus rapidement les lots notamment pour les préparations à péremption courte.

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