Développement et validation d’une méthode de dosage de gélule de clonidine par HPLC-UV

Alexis SAUVAGET1, Guillaume BINSON1, Antoine DUPUIS1. 1 Department of Pharmacy, University Hospital of Poitiers, France.

Introduction
La clonidine, un antihypertenseur central, est utilisée pour le diagnostic de la carence en hormone de croissance chez l’enfant, cependant il n’existe pas de formes orales disponibles permettant d’effectuer un dosage adéquat pour cette population (0,15 mg/m²). Par conséquent, notre unité produit des gélules de clonidine à partir de poudre. Selon la Pharmacopée européenne, plusieurs tests doivent être effectués pour évaluer la qualité et la sécurité de ces préparations. L’objectif de ce travail était de développer une méthode analytique pour effectuer un test d’uniformité de teneur en clonidine des gélules.

Matériels and méthodes
Une méthode analytique, utilisant l’analyse HPLC-UV, a été développée pour déterminer la teneur en clonidine dans notre préparation. Les paramètres de la méthode sont décrits comme suit : la phase mobile était composée d’un mélange d’acétonitrile et d’eau ultra-pure (25/75 ; v/v) avec 0,1% d’acide trifluoroacétique et le débit était réglé à 1 ml/min. La colonne était une Purospher® STAR RP-18 (5µm) 150x4,6 mm et la longueur d’onde du détecteur a été réglée à 210 nm. La gamme d’étalonnage de la méthode varie de 3,125 à 50 µg/mL. Trois niveaux de contrôle de qualité ont été réalisés (3,125 ; 12,5 et 50µg/mL respectivement niveau bas, moyen et haut). La validation de la méthode a été effectuée conformément à la ligne directrice internationale ICH Q2 R(1) en utilisant les critères suivants : linéarité et exactitude (précision et justesse).
La méthode analytique a été appliquée sur un lot de gélules de clonidine conformément à la Pharmacopée européenne (PE) (2.9.40).

Résultats/discussion
Le temps de rétention de la clonidine s’est avéré être de 3,30 min.
Les courbes de calibrage ont fourni une linéarité adéquate sur la plage de calibrage avec des coefficients de corrélation supérieurs à 0,9994 et une valeur résiduelle inférieure à 8,35%. L’équation moyenne de la ligne de régression linéaire était y= 386566(±10851)x + 63579 (± 52891).
Les coefficients de variation obtenus lors des études de répétabilité et de précision intermédiaire étaient respectivement inférieurs à 3,22 et 4,65 %, quelle que soit l’évaluation du contrôle de qualité. Le pourcentage moyen de récupération obtenu au cours de l’étude de fidélité est resté proche de 100 % de la valeur attendue.
L’application de la méthode d’analyse a montré que notre lot ne répondait pas aux critères de la PE, ce qui démontre l’intérêt de développer cette méthode d’analyse pour éviter les erreurs de dosage.

Conclusion
La méthode d’analyse a montré une linéarité et une précision, permettant de déterminer la teneur en clonidine des capsules. La méthode est adaptée à la validation en routine de la teneur en clonidine de par sa simplicité, sa rapidité (temps d’analyse inférieur à 5 minutes) et sa grande précision. Cela permettra d’effectuer un contrôle sur nos capsules de clonidine et d’améliorer la qualité de nos préparations

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